T-Zell-Reaktivität gegen Melanozyten-Differenzierungs- Antigene in Wächterlymphknoten von Melanom-Patienten

Abstract

Erkenntnisse zur Wechselbeziehung zwischen Immunsystem und Tumor haben die Therapie des Melanoms revolutioniert. Immuntherapien sind heute fester Bestandteil der Leitlinien und haben die Prognose selbst fortgeschrittener Stadien verbessert. Der Wächterlymphknoten (WLK), als erster Lymphknoten im Lymphabflussgebiet des Tumors, ist nicht nur Ort der primären Metastasierung, sondern spielt auch eine zentrale Rolle bei der Tumorimmunantwort. Um Mikrometastasen in den WLK zu detektieren, wird am Universitätsklinikum Tübingen die Lymphknoten- Disaggregations- Immunzytologie (LDI) angewendet. Im Rahmen dieses diagnostischen Verfahrens kann Zellsuspension übrigbleiben. Diese wird seit 2021 nicht mehr verworfen, sondern zum Aufbau einer Biobank kryokonserviert. Im ersten Versuchsteil der vorliegenden Arbeit wurde der Einfluss des Aufarbeitungszeitpunkts und der Kryokonservierung auf die Vitalität und zelluläre Zusammensetzung in den Zellsuspensionen durchflusszytometrisch untersucht. Die Zwischenlagerung in Medium und Aufarbeitung am Folgetag scheint keinen wesentlichen Einfluss auf die Vitalität und zelluläre Zusammensetzung der Wächterlymphknoten zu haben. Die Kryokonservierung verursacht einen Abfall der Vitalität und eine fragliche Verschiebung des CD4/ CD8- Verhältnisses. Melanozyten- Differenzierungs- Antigene (MDAs) sind weit verbreitete Tumor- assoziierte Antigene und somit eine potenzielle Zielstruktur verschiedener Immuntherapien. Jedoch sind Immuntoleranzmechanismen besonders ausgeprägt, da MDAs auch auf gesunden Melanozyten exprimiert werden. In Versuchsteil II erfolgte eine In- vitro- T- Zellstimulation von aufgetauten Zellsuspensionen mit Protein- überspannenden MDA- Peptidpools. In einigen untersuchten WLK konnten MDA- reaktive T- Zellen nachgewiesen werden. Alle vier untersuchten MDAs (gp100, MLANA, TRP2 und Tyrosinase) konnten mindestens einmal eine T- Zell- Reaktion hervorrufen. Dabei konnten sowohl CD4+- als auch CD8+- T-Zell-Reaktionen beobachtet werden. Die Reaktionen fielen im Vergleich zur Positivkontrolle jedoch deutlich geringer und mit einem veränderten Zytokin- Expressionsmuster aus. Immuntoleranzmechanismen sowie Einflüsse der Krykonservierung sind hierfür mögliche Erklärungen. Ein Einfluss des Status des WLK auf die Reaktivität konnte nicht nachgewiesen werden. Ebenso konnte kein Muster in mehreren WLK desselben Patienten erkannt werden. Zusammenfassend verdeutlicht diese Arbeit die Bedeutung der WLK bei der Immunüberwachung des Melanoms. In den WLK konnten nachweisbare T- Zell- Reaktivitäten gegen MDAs detektiert werden. Darüber hinaus zeigt die Arbeit, dass die Nutzung von nach der LDI verbleibender Zellsuspension einzigartige Möglichkeiten eröffnet, das Immunrepertoire in den WLK von Melanompatienten zu untersuchen.