In Vitro Evaluation of Lymphocyte Viability Following Vitrectomy: Implications for Ocular Lymphoma Biopsy Techniques

Abstract

Hintergrund: Untersuchung des Einflusses von Vitrektomgröße und Schnittrate auf das Überleben gesunder Lymphozyten und Lymphomzellen während diagnostischer Vitrektomien in einem In-vitro-Modell. Methoden: Im ersten Experiment wurden gesunde Lymphozyten aus Blutproben einer gesunden Person isoliert. Im zweiten Experiment kamen kultivierte MYD88- positive Lymphomzellen einer kommerziellen Zelllinie zum Einsatz. Zellsuspensionen mit definierten Konzentrationen (1×10³ Zellen/ml, 1×10⁴ Zellen/ml und 1×10⁶ Zellen/ml) wurden unter kontrollierten Bedingungen vitrektomiert – variiert wurde die Schnittraten (0/min, 1500/min und 5000/min) und Vitrektomgrößen (20G, 23G, 25G und 27G). Für jede Bedingung wurden drei technische Replikate durchgeführt. Die Zellintegrität wurde mittels Durchflusszytometrie (FACS) analysiert. Statistische Signifikanz zwischen den Gruppen wurde mit dem Kruskal-Wallis-Test bestimmt. Ergebnisse: Bei gesunden Lymphozyten zeigte sich keine Korrelation zwischen Überlebensrate und Vitrektomgröße oder niedrigeren Schnittraten. Für Lymphomzellen wurde jedoch eine signifikante negative Korrelation zwischen Vitrektomgröße und Zellüberleben festgestellt (Kendalls Tau τ = -0,253; p = 0,00048; Kruskal-Wallis χ² = 13,337; p = 0,00396). Schlussfolgerung: Größere Vitrektomlumen-Durchmesser korrelierten in unserer Studie mit höheren Überlebensraten von Lymphomzellen. Dies legt nahe, dass eine schonende Vitrektomietechnik bei der Glaskörperbiopsie die diagnostische zelluläre Ausbeute und damit Diagnostik von vitreoretinalen Lymphomen verbessern kann.

Purpose: To assess whether vitrectome size and cutting rate have an impact on cell survival of healthy lymphocytes and lymphoma cells during diagnostic vitrectomy in an in vitro model.

Methods: In the first experiment, healthy lymphocytes were isolated from blood samples of one healthy individual. In the second experiment, cultivated MYD88 positive lymphoma cells derived from a commercially available cell line were used. Suspensions with defined cell concentrations (1x103 cells/ml, 1x104 cells/ml and 1x106 cells/ml) were subjected to vitrectomy under controlled conditions, using aspiration only or varying cutting rates of 1500/min and 5000/min with vitrectome sizes of 20G, 23G, 25G and 27G. Three technical replicates were performed for each condition. Cell integrity in post-vitrectomy samples was assessed via fluorescence activated cell sorting (FACS). To verify statistically significant differences between groups, the Kruskal-Wallis test was employed.

Results: No correlation was observed between lymphocyte survival and either gauge size or lower cutting rates in healthy lymphocytes. However, a significant correlation between vitrectome size and cell survival was observed for lymphoma cells (Kendall’s tau τ = -0.253, p = 0.00048, Kruskal-Wallis χ² = 13.337, p = 0.00396).

Conclusions: In our study, larger vitrectome lumen diameters were associated with higher survival rates of lymphoma cells, suggesting that a careful approach during vitrectomy may enhance diagnostic yield.